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人纤维粘连蛋白(Fibronectin)检测试剂盒(ELISA方法)图片
产品货号:
ZN2176
中文名称:
人纤维粘连蛋白(Fibronectin)检测试剂盒(ELISA方法)
英文名称:
Human Fibronectin ELISA Kit
产品规格:
96T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法,用于体外定量分析人血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清中Fibronectin的含量。


预先包被的抗体为Fibronectin多克隆抗体。检测相抗体也为Fibronectin多克隆抗体,经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的FN呈正相关。


Fibronectin是细胞外基质中粘附糖蛋白。其表面结构域Arg-Gly-Asp(RGD),可被整合素(integrins)识别,介导细胞粘附。FN参与很多细胞的移动和吸附功能。本试剂盒所用标准品由人血浆提纯,分子量200~250KDa。


检测指标:Fibronectin;FN;纤维粘连蛋白;纤连蛋白
检测范围:156pg/ml~10ng/ml
特异性:系统和其他细胞因子无交叉反应
敏感性:<10pg/ml


组分规格数量
预包被抗人Fibronectin抗体的96孔板96T1板
重组人Fibronectin标准品(冻干)10ng/管2管
生物素标记抗人Fibronectin(100X)100μL1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)100μL1管
样品稀释液30mL1瓶
抗体稀释液12mL1瓶
ABC稀释液12mL1瓶
TMB显色液10mL1瓶
TMB终止液10mL1瓶
洗涤缓冲液(25X)20mL1瓶
封板膜4张

保存:2~8℃,有效期6个月。长期不用请置于-20℃可保存1年。


  • 标准规格酶标仪。
  • 自动洗板机。
  • 恒温箱
  • 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器。
  • 干净的试管和Eppendof管。
  • 用去离子水将25X洗涤缓冲液稀释25倍,成1X洗涤缓冲液。



  • 使用前TMB显色液应为无色透明溶液,若发现颜色异常,请及时与我司联系。
  • 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
  • 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活。
  • 为免交叉污染,要避免重复使用手中的吸头和试管。
  • 禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。
  • 本公司提供的96孔酶标板是单条可拆型酶标板,用户可按需求使用;剩余的酶标板请按保存条件贮存。
  • 揭封板膜和覆盖封板膜时应避免用力过大导致液体溅出。



  • 手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将1X洗涤缓冲液至少300μL注入孔内,浸泡1~2分钟。根据需要,重复此过程数次。
  • 自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。



样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。
  • 血清:用干净试管收集血液,凝固2小时后离心1000×g 10分钟,收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
  • 血浆:采用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,抽血后30分钟内离心1000×g 10分钟。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
  • 细胞培养上清:离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
  • 贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常10秒后,细胞就会被裂解。
  • 悬浮细胞:离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加入适量裂解液,用枪吹打把细胞吹散,用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后,10000~14000g离心3~5分钟,取上清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。



用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。根据待测因子含量高、中、低的不同,分别采取不同的稀释方案,以下方案仅供参考,样品的稀释应有详细记录。
  • 高:指待测因子在100~1000ng/ml。按1:100稀释。297μL样品稀释液加3μL样品。
  • 中:指待测因子在10~100ng/ml。一般按1:10稀释。225μL样品稀释液加25μL样品。
  • 低:指待测因子在156~10,000pg/ml。按1:2稀释。100μL样品稀释液加100μL样品。
  • 特低:指待测因子≤156pg/ml。样品一般不做稀释,或按1:2稀释。



  • FN标准品的稀释和使用:在使用前2小时内准备。试剂盒提供2管标准品,每管10ng,每次使用1管。
    • 配制10,000pg/ml标准品:取1mL样品稀释液加入标准品管内,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解。
    • 配制5000pg/ml~156pg/ml标准品:准备6只Eppendorf管,每管加0.3mL样品稀释液,分别标记上5000pg/ml,2500pg/ml,1250pg/ml,625pg/ml,313pg/ml,156pg/ml。取0.3mL 10,000pg/ml的标准品加入标记5000pg/ml的管中,混匀后同样取出0.3mL,加入下一只管中。余同此类推,直到最后一只样品管。
      注意:已经稀释的标准品(10,000pg/ml),应在12小时内使用。-20℃冷冻保存条件下,2天内可以使用,但不得反复冻融。
  • 生物素标记抗人FN抗体工作液的准备:在使用前2小时内准备。
    • 根据每孔需要100μL计算总的用量(实际配制时应多配制100~200μL)。
    • 按1μL生物素标记抗人FN加抗体稀释液99μL的比例配制工作液。轻轻混匀。
  • 亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)工作液的准备:在使用前1小时内准备。
    • 根据每孔需要100μL计算总的用量(实配时应多配制100~200μL)。
    • 按1μL亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)加ABC稀释液99μL的比例配制工作液。轻轻混匀。



已稀释好的ABC和TMB显色液在加入酶标板孔前都应预先在37℃中平衡至少30分钟。试剂或样品稀释时,切不可忘记混匀。每次检测都应该做标准曲线。用户须估计样品待测因子的含量,决定适当的稀释倍数。
  • 确定本次检测所需的已包被抗体的酶标板孔数目,并增加1孔作为TMB空白显色孔。总数=样品数+9;做双份检测时×2。其余重包装好放入冰箱中。
  • 将10,000pg/ml,5000pg/ml,2500pg/ml,1250pg/ml,625pg/ml,312pg/ml,156pg/ml的标准品各100μL依次加入一排7孔中,1孔只加样品稀释液的作为零孔。对于血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清,每孔加100μL已用样品稀释液稀释的样品。
  • 酶标板加上封板膜,37℃反应90分钟。
  • 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体;或甩去酶标板内液体,再对着吸水纸拍几下。不洗。
  • 将准备好的生物素抗人FN抗体工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白显色孔除外)。
  • 酶标板加上封板膜,37℃反应60分钟。
  • 1X洗涤缓冲液洗涤3次,每次浸泡1分钟左右(每孔洗液至少300μL)。
  • 将准备好的ABC工作液按每孔100μL依次加入(TMB空白显色孔除外)。
  • 酶标板加上封板膜,37℃反应30分钟。
  • 1X洗涤缓冲液洗涤5次,每次浸泡1~2分钟左右(每孔洗液至少300μL)。
  • 按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30分钟的TMB显色液,37℃避光反应20~25分钟。
    注意:显色时间供参考,因用户实验室条件差异,最佳显色时间会有所不同。此时肉眼可见标准品的前3~4孔有明显的梯度蓝色,后3~4孔差别不明显。
  • 按每孔100μL依次加入终止液,此时蓝色立转黄色。
  • 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
    有两种设定空白对照的方案:
    ① 将TMB空白显色孔(只加TMB显色液和终止液)设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去TMB空白显色孔的吸光值后,在坐标纸上画出曲线,以吸光值作为纵坐标,以浓度作为横坐标。
    ② 将零孔设为对照。所有的标准品和样品的吸光值减去零孔的吸光值后,得到的数据可以直接在坐标纸上画出曲线。
  • 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍,其实际浓度应该×N。



  • 加样品和标准品,37℃反应90分钟。不洗。
  • 加生物素标记抗体,37℃反应60分钟。1X洗涤缓冲液洗涤3次。
  • 加ABC,37℃反应30分钟。1X洗涤缓冲液洗涤5次。
  • TMB 37℃反应20~25分钟。
  • 加入终止液,读数。



取自某些批次质检数据,仅供参考,用户需要自己建立标准曲线。
浓度(pg/ml)015631262512502500500010000
OD值0.0370.1080.1900.3280.5271.0031.4181.983

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